佰莱博生物CO-IP免疫共沉淀技术服务

一、技术介绍

Co-IP实验使用偶联有 Protein A/G 的琼脂糖珠或磁珠（Protein A/G能够特异性结合免疫球蛋白）特异性结合诱饵蛋白的抗体，以此捕获诱饵蛋白。当体系中存在能够与诱饵蛋白相互作用的目的蛋白时，目的蛋白会与琼脂糖珠或磁珠上的诱饵蛋白结合，并在重力（琼脂糖珠）或磁力（磁珠）的作用下沉淀下来。然后通过蛋白印迹(westernblot，WB)技术分别使用诱饵蛋白抗体和目的蛋白抗体对沉淀中的蛋白质进行检测，若能够检测到沉淀中同时存在诱饵蛋白和目的蛋白，则说明这两种蛋白之间存在相互作用。

图1 CO-IP免疫共沉淀实验原理

二、实验流程

1.蛋白样品的制备

2.体系孵育

3.免疫共沉淀

4.洗涤

5.洗脱

6.WB检测或其他方式检测


三、文献案例解读

图3 验证蛋白 NLRP3 与蛋白 GSN 之间是否存在互作的结果图。实验中 NLRP3 蛋白带有 FLAG 标签，GSN 蛋白带有 Myc 标签。


Input：Flag 代表以 Anti-Flag 抗体对样本进行 WB 检测，条带4处空白，表示该样本中不存在 Flag-NLRP3，条带5、6表示两个样本中都存在 Flag-NLRP3；Myc 代表以 Anti-Myc 抗体对样本进行 WB 检测，条带1、2两处空白，表示这两个样本中不存在 Myc-GSN，条带3表示该样本中都存在 Myc-GSN。(Input 部分检测的是未经过 IP 处理的样本，显示各组中的样本成分，同时作为阳性对照。)
IP：Flag 表示该实验是用 Flag-NLRP3 作为诱饵蛋白，以 Anti-Flag 抗体作为诱饵蛋白抗体进行 IP 实验，目的蛋白是 Myc-GSN；Flag 代表以 Anti-Flag 抗体对 IP 后的样本做 WB 检测，Myc 代表以 Anti-Myc 抗体对 IP 后的样本做 WB 检测，条带8处的空白表示 Anti-Myc  抗体不会与 Flag-NLRP3 结合，而条带9、12则表示沉淀中同时存在 Flag-NLRP3 和 Myc-GSN，说明当体系中存在 Flag-NLRP3 时，对其进行免疫沉淀，Myc-GSN 会被共沉淀下来。综上所述，可以验证蛋白 NLRP3 与蛋白 GSN 之间存在互作。

后续如果需要进行质谱分析，样本量建议翻倍；

上表为单组实验所需送样量，如果需要进行对照实验，样本量建议翻倍；

样本置于1.5ml或其它型号的低吸附离心管里；

管上清楚标明样本名称，样本管上的名称需清晰明确，请核实无误；

用封口膜把样本管缠紧密封好；

将样本管置于保护用的50ml离心管或其它容器里，用适量纸、纱布或棉花塞紧，防止样本管晃荡。



佰莱博生物利用 Co-IP、GST Pull-Down、Small Pull-Down、生物物理检测平台 (BLI、SPR、MST、ITC)、CETSA、Target Engagement (TE) assay、体外药筛 (AlphaScreen、ADP-Glo、TR-FRET)、高内涵细胞成像与分析系统 (HCS，High-content screening)、Incucyte®长时间活细胞成像分析系统、酶联免疫斑点技术 (ELISPOT)、Luminex液相悬浮芯片技术等多种检测技术、与nanoDSF、SEC-MALS (静态光散射)、DLS (动态光散射)、AUC (分析型超离)、CD (圆二色光谱技术)  等检测技术平台交叉验证。提供细胞因子检测、生物大分子表征、生物分子互作分析、药物筛选、生物大分子稳定性分析及制剂筛选等服务。


目前，佰博莱生物分子互作平台已经具有 T 细胞的主要免疫调节因子 (Gal-1，Gal-3和Gal-9)、与糖尿病相关的胰岛素受体 (IR-A、IR-B、IGF-1R)、GLP-1R、HSA 等重要靶点相关亲和力研究、血管内皮生长因子 (VEGF 121、VEGF165)、免疫球蛋白 Fc 受体 (Fcγ RI、Fcγ RIIB、Fcγ RIIIA、不同种属的FcRn) 相关亲和力研究、免疫球蛋白超家族的细胞黏附分子 (Nectin-1，Nectin-2，Nectin-3，Nectin-4) 及整合素家族 (aVβ5、ITGB1、aVβ3等) 相关亲和力等重要靶点研究亲和力检测服务以及基于AlphaScreen技术的 (EED、ERα、Galectin 3等靶点) 高通量化合物筛选服务。