佰莱博生物GST Pull-Down技术服务

一、项目简介

GST，全称glutathione-S-transferase，即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白，能够和谷胱甘肽（Glutathione，GSH）稳定结合，将GSH与琼脂糖珠/磁珠交联可得GSH琼脂糖珠/磁珠。

该实验中使用带有 GST 标签的诱饵蛋白，可以结合到 GSH 琼脂糖珠/磁珠上。当体系中存在能够与诱饵蛋白相互作用的目的蛋白时，目的蛋白会与 GSH 琼脂糖珠/磁珠上的诱饵蛋白结合，从而在重力（琼脂糖珠）或磁力（磁珠）的作用下沉淀下来。然后通过蛋白印迹(westernblot，WB)技术分别使用 GST 抗体和目的蛋白抗体对沉淀中的蛋白质进行检测，若能够检测到沉淀中同时存在带有 GST 标签的诱饵蛋白和目的蛋白，则说明这两种蛋白之间存在相互作用。

图1 GST Pull-down 原理示意图


二、GST Pull-down 实验流程

1. 蛋白样品的制备

2. 体系孵育

3. GST Pull-down

4. 洗涤

5. 洗脱

6. WB检测或其他方式检测


三、GST Pull-down文献案例解读
图2 验证 Pnsll 和 Pelo 的之间是否存在互作的 GST Pull-down 结果图。蛋白 Pnsll 带有 GST 标签，蛋白 Pelo 带有 His 标签。

Input：Anti-His 代表以 Anti-His 抗体对样本进行 WB 检测，条带1、2表示两个样本中都存在 His-Pelo；Anti-GST 代表以 Anti-GST 抗体对样本进行 WB 检测，条带5、9表示该样本中存在 GST-Pnsll，不存在 GST；条带6、10表示，该样本中存在 GST，不存在 GST-Pnsll；
Pull-down：该实验使用 GST-Pnsll 作为诱饵蛋白进行 Pull-down 实验，His-Pelo 则作为目的蛋白；此时 Anti-GST、Anti-His 代表分别以 Anti-GST 抗体和 Anti-His 抗体对 Pull-down 处理后的样本进行 WB 检测，条带4处的空白表示 GST 不会与 His-Pelo 结合，而条带3、11则表示沉淀中同时存在 GST-Pnsll 和 His-Pelo，说明当体系中存在 GST-Pnsll 时，通过 GST Pull-down 就能将 His-Pelo “拉”下来。综上所述，可以验证蛋白 Pnsll 与蛋白 Pelo 之间存在互作。
后续如果需要进行质谱分析，样本量建议翻倍；
上表为单组实验所需送样量，如果需要进行对照实验，样本量建议翻倍；
样本置于1.5ml或其它型号的低吸附离心管里；
管上清楚标明样本名称，样本管上的名称需清晰明确，请核实无误；
用封口膜把样本管缠紧密封好；
将样本管置于保护用的50ml离心管或其它容器里，用适量纸、纱布或棉花塞紧，防止样本管晃荡。



佰莱博生物利用 Co-IP、GST Pull-Down、Small Pull-Down、生物物理检测平台 (BLI、SPR、MST、ITC)、CETSA、Target Engagement (TE) assay、体外药筛 (AlphaScreen、ADP-Glo、TR-FRET)、高内涵细胞成像与分析系统 (HCS，High-content screening)、Incucyte®长时间活细胞成像分析系统、酶联免疫斑点技术 (ELISPOT)、Luminex液相悬浮芯片技术等多种检测技术、与nanoDSF、SEC-MALS (静态光散射)、DLS (动态光散射)、AUC (分析型超离)、CD (圆二色光谱技术)  等检测技术平台交叉验证。提供细胞因子检测、生物大分子表征、生物分子互作分析、药物筛选、生物大分子稳定性分析及制剂筛选等服务。


目前，佰博莱生物分子互作平台已经具有 T 细胞的主要免疫调节因子 (Gal-1，Gal-3和Gal-9)、与糖尿病相关的胰岛素受体 (IR-A、IR-B、IGF-1R)、GLP-1R、HSA 等重要靶点相关亲和力研究、血管内皮生长因子 (VEGF 121、VEGF165)、免疫球蛋白 Fc 受体 (Fcγ RI、Fcγ RIIB、Fcγ RIIIA、不同种属的FcRn) 相关亲和力研究、免疫球蛋白超家族的细胞黏附分子 (Nectin-1，Nectin-2，Nectin-3，Nectin-4) 及整合素家族 (aVβ5、ITGB1、aVβ3等) 相关亲和力等重要靶点研究亲和力检测服务以及基于AlphaScreen技术的 (EED、ERα、Galectin 3等靶点) 高通量化合物筛选服务。