佰莱博生物酵母单交（Y1H）验证实验服务
1. 介绍
酵母单杂交（Yeast One-Hybrid assay，Y1H）技术是一种经典的分子生物学方法，主要用于研究特定蛋白质与DNA序列之间的相互作用。该技术在基因调控、转录因子识别及功能研究等领域得到了广泛应用。
佰莱博生物在酵母单杂交检测方面积累了丰富的经验，拥有多种Y1H检测系统，包括Y1HGold、Y187和EGY48。我们能够根据不同用户的需求，灵活匹配最适合的检测系统，以提供精准可靠的实验结果。
2. Y1H技术原理
Y1H实验包含两个主要组成部分：一个报告载体，包含位于报告蛋白基因的上游的DNA序列；另一个是表达载体，包含了与酵母转录激活域（AD）融合的转录因子（TF）。感兴趣的DNA通常称为“Bait”，而融合蛋白称为“Prey”。这两个构建体被转入适合的酵母菌株中，如果TF在酵母细胞核中结合到DNA上，AD会诱导报告蛋白的表达。需要强调的是，无论转录因子（TF）是作为激活子还是抑制子，酵母AD都能够促进报告基因的表达。因此，Y1H实验仅揭示了蛋白质与DNA之间的物理相互作用。（Reece-Hoyes JS and Marian Walhout AJ，2012）。
图1. Y1H技术原理（数据来源Reece-Hoyes JS，Marian Walhout AJ. Methods. 2012）
用于Y1H的酵母菌株通常在多个营养缺陷基因上发生突变，使其无法在缺乏特定化合物时生长。常用的报告基因（Reporter）包括Trp1（色氨酸）、Leu2（亮氨酸）、His3（组氨酸）和Ura3（尿嘧啶）。此外，细菌基因LacZ也常用于报告载体中。
3. 实验流程
酵母单杂互作验证实验中，常用的系统包括Y1HGold-pAbAi、Y187-pHis2以及EGY48-LacZ，这些系统的操作方法各有不同。下面是以Y1HGold-pAbAi系统为例的佰莱博生物所提供的Y1H服务实验流程。
4. Y1H实验应用类型
5. Y1H蛋白互作实验典型案例
5.1 人类转录因子STAT1 直接结合编码脯氨酰4-羟化酶α多肽I基因P4HA1启动子（Gou et al，2023）。
5.2 杨树AP2/ERF家族蛋白PdbCRF5特异性结合ABRE（ACGTG）基序（Lei et al，2024）。
参考文献
[1] Reece-Hoyes JS, Marian Walhout AJ. Yeast one-hybrid assays: a historical and technical perspective. Methods. 2012 Aug;57(4):441-7.
[2] Gou W, Yang Y, Shan Q, Xia S, Ma Y. P4HA1, transcriptionally activated by STAT1, promotes esophageal cancer progression. Pathol Int. 2023 Apr;73(4):147-158.
[3] Lei X, Fang J, Zhang Z, Li Z, Xu Y, Xie Q, Wang Y, Liu Z, Wang Y, Gao C. PdbCRF5 Overexpression Negatively Regulates Salt Tolerance by Downregulating PdbbZIP61 to Mediate Reactive Oxygen Species Scavenging and ABA Synthesis in Populus davidiana × P. bolleana. Plant Cell Environ. 2025 Feb;48(2):1088-1106.